产品简介:
谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(Cellular Glutathione Peroxidase Assay
Kit)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase)活性的试剂盒。绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的,且硒为该酶的活性中性组成部分。细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒如果和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(PHWT0075)配合使用,可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内过氧化物,在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作
用 。细胞内的脂类容易和自由基发生反应,产生脂类过氧化物。谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物,从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会
发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物,产生水或有机醇。如果以过氧化氢为底物进行检测,则同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。本试剂盒利用了一种间接测定的方法。谷胱甘肽过氧化物酶可以催化GSH产生GSSG,而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH催化GSSG产生GSH,通过检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。在上述反应中,谷胱甘肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤,因此NADPH的减少量和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。
本试剂盒利用了如下的反应原理,GPx为谷胱甘肽过氧化物酶,GR为谷胱甘肽还原酶,R-OOH为过氧
化物。
保存条件:
谷胱甘肽还原酶4℃保存,其余-20℃保存,半年有效。NADPH溶解后宜-70℃保存,4℃可以保存一
天,-20℃保存一周后NADPH会减少10%以上。GSH在配制成溶液后,适当分装,-20℃保存。
注意事项:
本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应,所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。如果在样品
中的还原剂无法避免,例如DTT、巯基乙醇等,则这些还原剂的总浓度至少低于0.1mM。0.15mM的DTT可以抑制40%的酶活力。
常用的Triton X-100、Tween 20等去垢剂都含有较高水平的过氧化物,会影响本试剂盒的测定。如
果必须使用这些去垢剂,最好使用纯度较高并注明含较低过氧化物的去垢剂。
为消除样品中可能含有的可以消耗NADPH的酶的干扰,可以检测不加过氧化物试剂的样品作为对照。
样品可以立即测定,也可以-70℃冻存待以后测定。
一定要严格控制反应时的温度,否则会引起较多误差。
NADPH不太稳定,要严格按照后续说明操作,谨防失活。
谷胱甘肽还原酶配制在接近饱和的硫酸铵溶液中,存放一段时间后容易出现硫酸铵结晶,属正常现
象。室温孵育促进晶体溶解后可继续使用。如果有水分蒸发到管壁上,则需先离心,随后再促进晶体溶解。如果出现盖子未盖紧导致水汽泄漏的情况,则需补加蒸发掉的水量,然后再促进晶体溶解。可在晶体溶解后使用,但不溶解晶体直接使用也可以,此时可以使用的酶的总体积会稍稍减小一些。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。